★ENZO-Autophagy detection kit을 소개합니다★

transfection 없이도 Live cell 에서 손쉽게 autophagy를 확인할 수 있습니다.

Q&A>

Q. Autophagy detection kit 는 어떤 제품인가요?

A. Live cell에서 autophagy를 형광으로 detection 하는 kit입니다. 또한, autophagy inducer와 autophagy inhibitor 도 함께 포함되어 있으며, 형광 현미경, 형광 플레이트 리더기, FACS를 통해 autophagy 생성 여부를 확일 할 수 있습니다

Q. Cyto-ID Autophagy detection kit과 Cyto-ID Autophagy detection kit2.0의 차이점은 무엇인가요?

A. 2.0 버전은 Autophagy detection dye의 형광 강도가 기존 제품보다 향상된 제품입니다. 따라서 autophagy의 생성량이 적은 경우, Confocal이 아닌 일반 형광 현미경을 사용하는 경우 보다 적합합니다.

Q. LC3-GFP(or RFP) transfection을 통해 autophagy를 관찰하고 있습니다. 이 방식과 비교했을 때, autophagy detection kit의 장점은 무엇 인가요?

A. Autophagy detection kit는 permeable autophagic ive fluorescence dye를 사용하여, transfection 과정없이 autophagy를 관찰 할 수 있는 제품으로 실험시간을 획기적으로 줄 일 수 있습니다. 또한, transfection이 잘되지 않는 cell 의 경우에도 autophagic ive fluorescence dye 를 사용하여 최상의 효율로 autophagy를 detection 할 수 있습니다. 일반적으로 stable cell line 구축 시, 세포의 passage 크게 증가하여 세포가 노화된 상태인 반면, Autophagy detection kit을 사용하면 low passage에서 autophagy를 detection 할 수 있습니다. 특히, LC3의 경우, autophagic vascular의 생성에만 관여하지 않기 때문에, 비교적 높은 background를 가지고 있습니다, 하지만, Autophagy detection kit은 autophagic vascular에만 결합하기 때문에 LC3-GFP(or RFP) transfection 대비 훨씬 낮은 background를 가집니다.

Q. Autophagic ive fluorescence dye가 결합하는 위치는 어디일까요?

A. 안타깝게도, Enzo life science 본사측에서는 특허의 문제로 dye가 결합하는 위치에 대한 정보를 공개하지 않았습니다. (기본 Dye의 염색 mechanism에 대해서는 답변을 주었습니다.) 다만, 이미 Nature, Cell 등의 유명 저널을 포함한 150편이상의 논문이 해당 제품을 사용하여 출판 되었으며, Reviewer의 어떠한 질문에도 Enzo본사는 정확한 답변을 제공하여 논문 출판에 아무런 문제가 없도록 도와줄 것을 약속 하였습니다

Q. 저희 연구실에서는 RFP-GFP-LC3 transfection을 통해, autophagy의 flux를 관찰하고 있습니다. 해당 제품도 가능 할까요?

A. 네, 가능합니다. Kit 구성품 중 chloroquine을 통해 early autophagosome과 late autolysosome을 구분하여 관찰 할 수 있습니다. Acidic한 환경에서 형광 세기가 약해지는 GFP-LC3와 달리 Autophagy detection kit의 dye는 acidic한 환경에서도 signal이 동일하게 유지 됩니다.

Q. Autophagy detection kit 을 사용하여 세포 내 기관 (mitochondria, ER, golgi, 등)의 phagy 관측도 가능할까요?

A. 네, 가능합니다. 해당 제품의 Autophagy Detection dye가 green color로 emission (Excitation ~480 nm, Emission ~530nm)하기 때문에 green color 이외의 color로 세포 내 기관을 염색한다면 어떠한 phagy도 관측이 가능합니다. 특히 mitophagy에 대해서는 Enzo life science 본사 및 많은 연구자에 의한 테스트가 되어 있습니다.

Q. Immunofluorescence 실험 시, Autophagy detection kit 과 함께 사용 가능할까요?

A. 네, 가능합니다. Live cell에 autophagic ive fluorescence dye 를 염색한 뒤, fix 시킨 후, 기존의 실험 방식을 따라 실험을 진행하시면 됩니다 

자세한 문의 사항은 (주)동인바이오텍 서울 본사 학술팀

02-431-7375 (내선 3) 또는 tech@donginbio.com 을 통해서 가능합니다